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硫乙醇酸鹽流體培養基制備及常見問題解答

紀旭艷
錄入時間:2020-5-26 10:27:08 來源:青島海博生物

一、用途及介紹

 

  用途:此培養基常用于藥品及生物制品中的需氧/厭氧菌檢驗及厭氧菌的增菌培養。

  培養基狀態和性質:制備好的硫乙醇酸鹽流體培養基呈淡黃色透明流體狀,有一定黏度,上下分層。上層由于接觸空氣中的氧氣,培養基內含的刃天青顯淡紅色,需氧菌可在此處生長。下層為厭氧層,呈淡黃色,厭氧菌可在此處生長。

  優點:硫乙醇酸鹽流體培養基中因含有少量瓊脂,培養基內無液體對流現象,且含有還原性的胱氨酸、硫乙醇酸鈉,因此可以穩定地保持下層的厭氧環境。在進行厭氧菌的增菌培養時,無需借助厭氧罐、厭氧培養箱等設備,也無需覆蓋液體石蠟,即可達到良好的培養效果,因此非常適合用于厭氧菌的復蘇及增菌培養。

 

二、使用方法及注意事項

 

  培養基制備:參照標簽,按比例稱取培養基加熱溶解于純化水中,分裝至試管或瓶中,121℃高壓滅菌,冷卻后備用。

 

  注意事項:

  1.培養基中含有少量瓊脂,因此在滅菌前需加熱煮沸至培養基內的瓊脂完全溶解且分布均勻,方可進行分裝,滅菌;

  2.培養基分裝容器時,裝量應與容器比例合適,選擇細高型容器分裝更有利于減少氧化層的高度,若分裝密閉容器中空氣較多,可充入氮氣后再進行密封;

  3.使用前注意觀察培養基氧化層的高度,在供試品檢查前,培養基氧化層高度不能超過培養基深度的1/5;若超過1/5,可對培養基進行沸水浴加熱驅氧,只限加熱一次;

  4.硫乙醇酸鹽流體培養基不可振蕩培養,只能靜置培養。振蕩會使培養基上下層產生液體對流,無法維持下層培養基的無氧狀態,因此會導致厭氧菌不能生長。

 

三、常見問題

 

  1.制備好的培養基整瓶呈現淡黃色,看不到紅色氧化層是怎么回事?

 

  答:通常在密閉容器里的硫乙醇酸鹽流體培養基會出現這個現象。硫乙醇酸鹽流體培養基上層只有接觸氧氣才會變紅,若上層沒有氧氣接觸,就會整體呈淡黃色。自制密閉滅菌后的培養基,若容器內殘留空氣很少,或滅菌前進行了充氮氣排氧,滅菌后可能會看不到氧化層。

 

  2.滅菌后培養基是澄清的,冷卻后出現部分白色絮狀物,是什么原因?

 

  答:硫乙醇酸鹽流體培養基內有少量瓊脂,如果配制不當,瓊脂未充分溶解分布均勻,滅菌冷卻后聚集的瓊脂凝固成團塊,就會出現白色絮狀物。因此在滅菌前必須加熱至瓊脂完全溶解并充分攪拌,使瓊脂在培養基中分布均勻,再進行高壓滅菌,冷卻后的培養基就是澄清的淡黃色透明流體狀。

 

  3.滅菌后的培養基顏色偏深黃,且pH偏低不合格,是什么原因?

  

  答:這種情況一般是滅菌過度造成的。培養基中的酵母浸粉和葡萄糖在滅菌過度后易出現糖焦化現象,造成顏色偏深,pH下降,嚴重時可能觀察不到氧化層。因此在培養基滅菌結束后,需及時從滅菌鍋中取出,避免長時間滅菌或保溫,更不可重復高壓滅菌。

 

  4.滅菌后的培養基,分裝試管使用時,整根試管變紅色,是否還能使用?

 

  答:此培養基建議先加熱煮沸溶解,分裝,再滅菌。如先滅菌后分裝,由于分裝過程中培養基接觸氧氣,剛分裝結束時,部分培養基可能呈現全紅色,一般室溫靜置1h左右可重新見到分層現象。如靜置后仍然整體培養基呈紅色不分層,可沸水浴加熱驅氧,冷卻后即可重新出現分層。重新分層的培養基可正常使用。

 

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